直鏈淀粉含量試劑盒說明書

                                 微量法100管/96樣

注    意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈，其含量測定對于評價食品營養價值和調查植物體內糖代謝都有重要意義。

測定原理：

利用80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，直鏈淀粉與碘形成的絡合物在620nm下有吸收峰。

需自備的儀器和用品：

酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、YI醚和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶；4℃保存；

試劑二：YI醚100mL×1瓶；(自備)

試劑三：液體100mL×1瓶；4℃保存；

試劑四：液體2mL×1瓶；4℃保存；

試劑五：液體300uL×1瓶；4℃保存；

淀粉提取：

稱取0.01~0.02g烘干樣本（建議稱取約0.01g）于研缽中研碎，加入1mL試劑一，充分勻漿后轉移到EP管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑二（YI醚）振蕩5min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑三充分溶解，90℃水浴10min，冷卻后待測。

測定步驟：

1、   分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至620nm，蒸餾水調零。

測定管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL樣本， 14μL試劑四，120μL蒸餾水，2μL試劑五，44uL蒸餾水，混勻，測定620nm處吸光值，記為A測定。

空白管：在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL試劑三， 14μL試劑四，120μL蒸餾水，2μL試劑五，44μL蒸餾水，混勻，測定620nm處吸光值，記為A空白。

直鏈淀粉含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y=1.755x+0.0062；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測定-A空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A測定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測定-A空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A測定-A空白-0.0062) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

b. 用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y= 0.8775x+0.0062；x為標準品濃度（mg/mL），y為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測定-A空白-0.0062)×V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A測定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測定-A空白-0.0062)×V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A測定-A空白-0.0062) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g

Z低檢測限為1mg/g干重或10μg/mgprot。