土壤酸性蛋白酶（Solid -Acid Protease，S-ACPT）試劑盒說明書

                                       微量法100管/48樣

注   意 ：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質以及其他含蛋白質氮的有機化合物的轉化，其水解產物是高等植物的氮源之一。S-ACPT在酸性環境下催化蛋白質水解，與土壤有機質含量、氮素及其他土壤性質有關。

測定原理：

酸性條件下，S-ACPT可將酪蛋白水解產生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰。

所需儀器及設備：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水

試劑組成和配置：

液體一：1mL×1支，4℃保存。

液體二：0.5mL×1支，4℃保存。

試劑一的配制：臨用前按液體一：液體二：蒸餾水=140（μL）：20（μL）：21（mL）的比例配制，現配現用，如出現白色絮狀沉淀則不能用。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入6ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入2mL試劑七，沸水浴加熱溶解，然后加入8ml試劑一，充分混勻備用，用不完的試劑4℃保存；

試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入30ml蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；

試劑五：液體8mL×1瓶，4℃保存；

試劑六：液體1.5mL×1支，0.05mg/ml標準酪氨酸溶液，4℃保存；

試劑七：液體5mL×1支，4℃保存；

樣品處理：

新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。

測定操作：

1、   試劑一的配制：見試劑的組成和配制。

2、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至680nm，蒸餾水調零。

3、樣本測定：

混勻，40℃水浴30min，振蕩5-6次，使土樣與反應液充分接觸

混勻，8000g25℃離心10min，取上清液，在EP管或96孔板中加入下列試劑

混勻，40℃水浴20min，8000g 25℃離心10min，取上清液200μL，680nm下讀取各管吸光值A

注意：標準管只需測一次。每個測定管設一個對照管。

S-ACPT活性計算：

單位定義：每天每g土樣中產生1mg酪氨酸為一個 S-ACPT活力單位。

S-ACPT(mg/d/g土樣)=C標準×(A測定管-A對照管)÷A標準管×V反總÷W÷T=24×(A測定管-A對照管)÷A標準管

C標準管：標準管濃度，0.05mg/mL；V反總：反應體系總體積，0.2mL；T：反應時間，30min=1/48d； W：樣本質量，0.02g。